جداسازی، خالص سازی و بررسی خواص پپتیدهای بیواکتیو (مولکول های فعال زیستی) از کانژوگه لیزوزیم- دکستران

لیزوزیم (n- acetyl muramic hydrolase ec:3,2,1,17) گروهی از آنزیم ها هستند که نقش بارز آن ها خاصیت ضد میکروبی است. در واقع یک آنتی بیوتیک طبیعی می باشند. این آنزیم ها با هیدرولیز پیوندهای 1,4 beta بینn-acetyl muramic acid و n-acetyl-d-glucosamine موجود در دیواری پپتیدوگلیکانی باکتری هارا تخریب می کنندکه این پیوند ها بخش زیادی از غشای بیرونی دیواره سلولی بسیاری از باکتری های زنده را تشکیل می دهند. این آنزیم اثر ضد میکروبی خوبی در برابر باکتری های گرم مثبت دارد و بر باکتری های گرم منفی تقریبا بی اثر است، دیواره سلولی باکتری های گرم مثبت دارای لایه ضخیم پپتیدوگلیکانی است و فاقد لایه لیپو پلی ساکاریدی است در حالیکه در باکتری های گرم منفی دیواره خارجی دارای لایه لیپو پلی ساکاریدی ضخیمی می باشد، وجود همین لایه لیپو پلی ساکاریدی مانع فعالیت ضد باکتریایی لیزوزیم در برابر باکتری های گرم منفی می شود. واکنش میلارد به تولید و بهبود خواص عملکردی پروتئین ها کمک می کند تحقیقات نشان می دهد که برهمنکش لیزوزیم با پلی ساکاریدهای از طریق واکنش میلارد موجب گسترش طیف عملکرد ضدباکتریایی لیزوزیم و بهبود خواص عملکردی آن می شود. در سالهای اخیر توجه زیادی بر روی پپتیدهای مشتق شده از پروتئینهای مواد غذایی شده است، این پپتیدها که دارای ویژگی فعال بیولوژیکی (بیواکتیو) هستند وقتی که در داخل توالی اسیدهای آمینه، در مولکول پروتئین اصلی هستند چنین خاصیتی را نشان نمیدهند و هنگامی فعال میشوند که توسط سیستمهای آنزیمی خاصی از مولکولهای پروتئین اصلی جدا شوند. این پپتیدها دارای عملکرد بیولوژیکی و یا تأثیرات فیزیولوژیکی مانند خاصیت تخدیری، کاهنده فشارخون، خواص-ضداکسیدانی ، خواص ضدمیکروبی، ناقل مواد معدنی و... هستند هدف از این تحقیق تولید پپتیدهای بیواکتیو از لیزوزیم دکستران کانژوگه با استفاده از آنزیم فیسین و تریسین و جداسازی آنها و تعیین خواص، آنتی میکروبی- آنتی اکسیدانی و آنتی ace آنها است. لیزوزیم دکستران کانژوگه به کمک آنزیم تریسین و فیسین هیدرولیز شده و قطعات حاصل از هضم آنزیمی لیزوزیم، دکستران کانژوگه پس از لیوفیلیزه با روش کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون تفکیک گردیدند، سپس خواص زیست فعالی نمونه های حاصل از کروماتوگرافی بررسی شدند. نتایج به دست آمده از کروماتوگرافی نشان داد فرکسیون 4 نمونه کنترل (نمونه فاقد آنزیم) وفرکسیون 4 از نمونه با آنزیم تریپسین وفرکسیون 4 از نمونه با آنزیم فیسین به ترتیب 50?، 88? ،80? مهار ace را نشان می دهند همچنین فرکسیون 4 نمونه کنترل (نمونه فاقد آنزیم) وفرکسیون10 با آنزیم تریپسین به ترتیب 36 و 50 برابر نسبت به تتراساکلین خاصیت آنتی میکروبی علیه باکتری اشرشیاکلی نشان می دهند. فرکسیون 9 نمونه کنترل (نمونه فاقد آنزیم) و فرکسیون10 با آنزیم تریپسین به ترتیب 83 و 50 برابر نسبت به تتراساکلین خاصیت آنتی میکروبی علیه باکتری باسیلوس سرئوس نشان می دهند. فرکسیون 4 نمونه کنترل (نمونه فاقد آنزیم) 100? فعالیت آنتی اکسیدانی نشان می دهد برای نمونه با آنزیم تریپسین (فرکسیون 4) با91% وآنزیم فیسین( فرکسیون 4) با 95% می باشد. نتایج نشان می دهد که کانژوگه لیزوزیم دکستران باعث افزایش خواص عملکردی و زیست فعالی می شود. و همچنین هضم آنزیمی کانژوگه لیزوزیم دکستران پپتیدهای کوچک را تولید می کند که می توانند ویژگی بیو اکتیو داشته باشند و نتایج قابل توجهی از این تحقیق در مورد خاصیت آنتیace و آنتی میکروبی مشاهده گردید.